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超微量分光光度計與核酸定量的應用關(guān)聯(lián)

更新時(shí)間:2023-02-06      點(diǎn)擊次數:691
   超微量分光光度計無(wú)須配備電腦的全波,可快速準確的檢測核酸、蛋白質(zhì)和細胞溶液,同時(shí)配備比色皿模式,進(jìn)行細菌等培養液濃度的檢測,可達到0.5ng/ul。核酸檢測每次測量所需要的樣品量?jì)H需0.5-2ul即可直接將樣品點(diǎn)于加樣臺上。無(wú)需比色杯或毛細管等附件。測量結束后,可以選擇直接將樣品擦去或者再用移液器回收樣品。所有步驟簡(jiǎn)單快速,一氣呵成。

超微量分光光度計

 


  超微量分光光度計的主要原理是根據朗伯-比爾(Lamber-Beer)定律進(jìn)行濃度測定的:
 
  A=K·C·L;
 
  式中:
 
  A為吸光度;
 
  K為吸(消)光系數;
 
  C為溶液的濃度;
 
  L為液層厚度。
 
  此公式說(shuō)明在入射光一定時(shí),溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度成正比。此式就是光的吸收定律的數學(xué)表達式,又叫朗伯-比爾定律。
 
  超微量分光光度計于核酸定量上的應用:
 

超微量分光光度計

 

  核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率高的功能??梢远繙y定溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA以及RNA含量。這是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵,具有紫外吸收的特性,最大的吸收波長(cháng)在260nm,吸收波谷在230nm。
 
  除了核酸濃度,超微量分光光度計同時(shí)顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類(lèi)物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
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